人正常結腸上皮細胞；NCM460

細胞英文(簡(jiǎn)稱(chēng)）：NCM460

細胞名稱(chēng)：人正常結腸上皮細胞；NCM460

背景資料

收到細胞，請查看瓶子是否有破裂，培養基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快和我們聯(lián)系。如包裝完好，取出25cm2培養瓶，75%酒精消毒,拆下封口膜,在顯微鏡下觀(guān)察細胞形態(tài)是否正常，細胞的貼壁情況以及細胞密度,然后放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置2-3小時(shí)，以穩定細胞狀態(tài)。 

細胞來(lái)源：incell

代次：P3

規格：T25

細胞數：1x10^6 cells

組織來(lái)源：結腸上皮

人正常結腸上皮細胞；NCM460形態(tài)：貼壁

細胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

細胞檢測：細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

培養條件：1640+10% FBS；37℃，5% CO2    

傳代方法：*建議1:2-1:3 兩天換液一次

凍存條件：90%FBS+10%DMSO

動(dòng)物細胞培養,大致的步驟是這樣:

1.從動(dòng)物胚胎或者一些剛出生的動(dòng)物的器官或者組織上取得細胞,配制成細胞懸浮液.把細胞液放到培養瓶中,在培養箱里培養--------原代培養.

但是,不要以為這樣就能一直無(wú)限培養下去.

因為人正常結腸上皮細胞；NCM460在那個(gè)瓶壁上生長(cháng)的時(shí)候,如果大量增殖,細胞之間會(huì )彼此相碰,細胞細胞就會(huì )停止分裂增殖,出現一種接觸抑制.

2.我們?yōu)榱怂鼈兡芾^續增殖,就用胰蛋白酶再把它們分開(kāi),然后再配制成細胞懸浮液,分開(kāi)裝到好幾個(gè)瓶子里繼續培養--------傳代培養.

1.      棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.      加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.      按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4.      將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí)，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
 
注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。